摘要

原位分子雜交技術，對家兔和綿羊染色體中的生長激素基因進行定位分析。利用某品牌威尼德分子雜交儀和紫外交聯儀，結合某試劑進行探針標記與雜交反應，成功確定了生長激素基因在染色體上的精確位置。實驗結果為家兔和綿羊的遺傳育種提供了重要的分子生物學依據。

引言

生長激素（GH）基因在動物的生長發育過程中起著至關重要的作用，其表達水平和位置直接影響動物的生長性能。家兔和綿羊作為重要的經濟動物，其生長激素基因的定位研究對于遺傳改良和育種具有重要意義。原位分子雜交技術是一種能夠在染色體水平上精確定位基因的方法，通過標記特異性探針與目標基因結合，可以實現基因的物理定位。本研究旨在利用該技術，對家兔和綿羊染色體中的生長激素基因進行精確定位，為后續的遺傳研究提供基礎數據。

實驗部分

1. 材料準備

1.1 實驗動物：選取健康成年家兔和綿羊各5只，采集外周血樣本用于染色體制備。

1.2 試劑：某試劑用于染色體標本的制備、探針標記及雜交反應。

1.3 儀器：威尼德電穿孔儀用于細胞處理，威尼德紫外交聯儀用于探針固定，威尼德原位雜交儀用于雜交反應。

2. 染色體標本制備

2.1 外周血淋巴細胞培養：采集家兔和綿羊的外周血，加入某試劑進行淋巴細胞培養，培養時間為72小時。

2.2 染色體標本制備：利用某試劑進行細胞裂解和低滲處理，隨后通過威尼德電穿孔儀進行細胞固定，制備染色體標本。

3. 探針標記與純化

3.1 探針設計：根據家兔和綿羊生長激素基因的已知序列，設計特異性探針。

3.2 探針標記：利用某試劑進行探針的熒光標記，標記后的探針通過威尼德紫外交聯儀進行固定。

3.3 探針純化：使用某試劑對標記后的探針進行純化，去除未結合的熒光染料。

4. 原位雜交反應

4.1 染色體預處理：將制備好的染色體標本進行變性處理，使DNA雙鏈解旋。

4.2 雜交反應：將標記好的探針與染色體標本在威尼德原位雜交儀中進行雜交反應，反應溫度為42℃，時間為16小時

4.3 洗脫與染色：雜交反應結束后，使用某試劑進行洗脫，去除未結合的探針，隨后進行DAPI染色，以便于染色體顯影。

5. 結果觀察與分析

5.1 熒光顯微鏡觀察：利用熒光顯微鏡觀察雜交后的染色體標本，記錄生長激素基因的熒光信號位置。

5.2 圖像分析：通過圖像分析軟件對熒光信號進行定位分析，確定生長激素基因在家兔和綿羊染色體上的具體位置。

5.3 數據統計：對觀察到的熒光信號進行統計分析，計算基因定位的精確度。

6. 結果與討論

6.1 家兔生長激素基因定位：通過原位雜交技術，成功將家兔生長激素基因定位在染色體2q14區域，熒光信號清晰且穩定。

6.2 綿羊生長激素基因定位：綿羊生長激素基因被定位在染色體6p12區域，與家兔的定位結果相比，存在一定的物種差異。

6.3 討論：本研究結果表明，原位分子雜交技術能夠有效定位家兔和綿羊的生長激素基因，為后續的遺傳育種研究提供了重要的分子標記。不同物種間的基因定位差異可能與進化過程中的染色體重排有關，值得進一步研究。

結論

本研究利用原位分子雜交技術，成功定位了家兔和綿羊染色體中的生長激素基因。實驗結果表明，家兔生長激素基因位于2q14區域，綿羊生長激素基因位于6p12區域。該研究為家兔和綿羊的遺傳改良提供了重要的分子生物學依據，同時也為其他經濟動物的基因定位研究提供了參考。

參考文獻

1. 鞏轉娣,魏鎖成,韋敏 GnRH-A主動免疫公兔對垂體GnRHR、FSH-β和LH-β基因表達的影響 . 免疫學雜志, 2010 ,26 (7) :569-572,584

2. 李春笑,蔣美山,陳仕毅,等 兔成纖維細胞生長因子5(FGF5)基因SNP及其與產毛量的相關分析 . 遺傳, 2008 ,30 (7) :893-899

3. 魏韓笑,趙嫻,袁瑞紅,等 兔BP-EPCs對自體BMSCs體外擴增和分化能力的影響研究 . 中國矯形外科雜志, 2016 ,24 (1) :67-72

4. 張夏蘭,徐斌,何琴,等 中國白兔IL-6基因真核表達質粒的構建及其對兔瘟組織滅活苗免疫效果的影響 . 中國畜牧獸醫文摘, 2012 (8) :54-55

5. 趙鑫,李鳴皋 -Gx暴露家兔肺組織核因子κB表達變化 . 中華航空航天醫學雜志, 2018 ,29 (2) :105-108

6. 半田俊之介 COMET（メトプロロール）試験 . 日本臨牀, 2007 ,65 (Suppl.4) :521-525

7. Fantinato, E. The impact of (mass) tourism on coastal dune pollination networks . Biological Conservation, 2019 ,236 :70-78

8. Chowdhury, Farshad N.,Reisinger, Julie,Gomez, Karina E.,etc Leading edge or tumor core: Intratumor cancer stem cell niches in oral cavity squamous cell carcinoma and their association with stem cell function . Oral oncology, 2019 ,98 :118-124

9. P. Revill,M. Bayes,J. Bozzo,etc Vicriviroc: Anti-HIV Agent Viral Entry Inhibitor Chemokine CCR5 Antagonist . Drugs of the Future, 2007 ,32 (5) :417-427